原位雜交是一種非常重要的技術,因為它可以在細胞或組織的自然環(huán)境中研究基因表達和調(diào)控。它可以幫助科學家們了解基因在特定組織或細胞類型中的作用和功能,以及在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中的變化。此外,這項技術還可以用于檢測基因變異和染色體異常,以及監(jiān)測細胞生長和凋亡。
雖然原位雜交是一項非常有用的技術,但它也有一些限制。首先,探針的特異性可能受到干擾,導致錯誤的結果。其次,探針的數(shù)量和位置可能受到細胞或組織中其他成分的影響。此外,這項技術的操作比較繁瑣,需要專門的技術和設備,熒光原位雜交,而且需要大量的實驗和對照才能獲得可靠的結果。
菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,原位雜交檢測,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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