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洋蔥亞細(xì)胞定位 如何定位重要細(xì)胞器 亞細(xì)胞定位辦法就是用來肯定細(xì)胞內(nèi)分子在細(xì)胞中的位置的一種辦法。如何使用熒光顯微鏡技術(shù)來定位洋蔥細(xì)胞中的一些重要細(xì)胞器。
植物細(xì)胞是由許多不同的細(xì)胞器組成的，這些細(xì)胞器在細(xì)胞內(nèi)扮演著不同的角色。為了研究這些細(xì)胞器的功能和位置，蛋白互作，科學(xué)家們使用各種技術(shù)來對它們進行定位。其中一種常用的技術(shù)是熒光顯微鏡技術(shù)，它可以通過標(biāo)記特定的蛋白質(zhì)或化合物來觀察它們在細(xì)胞內(nèi)的位置。
禾谷菌 CgRab5A 的亞細(xì)胞定位研究：劉涵等人利用多片段一步法將 CgRab5A 自身啟動子、GFP 片段和 CgRab5A 開放閱讀框（ORF）片段到 pKNT 載體上，轉(zhuǎn)化型禾谷菌的原生質(zhì)體后，通過共聚焦顯微鏡觀察 GFP-CgRab5A 在菌絲和孢子內(nèi)的定位情況。結(jié)果表明，GFP-CgRab5A 在菌絲和孢子細(xì)胞內(nèi)均呈點狀分布，定位于早期內(nèi)涵體上。
水稻 OsUF 的亞細(xì)胞定位：丁作美等人通過得到水稻 E3 泛素連接酶 — 泛素融合蛋白（OsUF）基因的 cDNA 序列，并利用 Gateway 同源重組體系將 OsUF cDNA 全長重組到融合表達綠色熒光蛋白（GFP）的表達載體上，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達系統(tǒng)進行亞細(xì)胞定位。結(jié)果顯示，OsUF 蛋白定位在細(xì)胞核。
為什么不先對一個基因做預(yù)測，在預(yù)測的結(jié)果上直接做共定位？
不同的預(yù)測網(wǎng)站有不同的計算方法，同一個基因在不同的預(yù)測網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實驗得到的，對于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推薦先做普通定位，根據(jù)普通定位的結(jié)果再決定做哪種細(xì)胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時熒光蛋白不亮？
不同物種的細(xì)胞可能對基因表達有影響，當(dāng)在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時，可以考慮換一種受體材料。另外，如果是分泌蛋白，在原生質(zhì)體中無法觀察到熒光，此時可以考慮注射葉片來觀察熒光。
拍攝時為什么有明場通道？
（1）顯示細(xì)胞狀態(tài)，有活力的原生質(zhì)體細(xì)胞應(yīng)該是飽滿圓潤的，變形或破碎的細(xì)胞說明此時細(xì)胞不是適狀態(tài)或細(xì)胞已。
（2）顯示熒光確實是細(xì)胞內(nèi)蛋白表達的，而不是細(xì)胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。
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