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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，染色體原位雜交，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，染色體熒光原位雜交，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)：在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如，通過標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測環(huán)境中微生物種群的分布和變化，原位雜交，進(jìn)而研究其對環(huán)境的影響和作用。
進(jìn)化生物學(xué)：在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如，熒光原位雜交，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。
植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個方面：
1. 制備組織樣品：從植物中取出需要研究的組織樣品，如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品：將組織樣品固定在載玻片上，通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。
3. 處理組織樣品：對固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理，以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。
4. 制備DNA探針：根據(jù)需要研究的基因序列，設(shè)計并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素，以便于檢測。
5. 雜交DNA探針：將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交，通常需要在高溫下進(jìn)行，以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。
6. 檢測雜交信號：通過熒光顯微鏡或計數(shù)器等設(shè)備，檢測DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況，確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。
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第3年
