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湖北熒光原位雜交-武漢貝科新肽公司(圖)

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而是對(duì)完整的斑馬魚(yú)胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測(cè),從整體上把握探針的結(jié)合部位,然后對(duì)胚胎進(jìn)行切片,以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚(yú)分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來(lái)檢測(cè);也可以是非同位素的探針,通過(guò)熒光或酶法予以檢測(cè)。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過(guò)后者,以標(biāo)記探針,然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測(cè)。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長(zhǎng)期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn),不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號(hào)檢測(cè)和圖像分析等。在探針制備過(guò)程中,使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來(lái)標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過(guò)程中,熒光原位雜交,細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過(guò)程中,探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交,形成可檢測(cè)的熒光信號(hào)。在信號(hào)檢測(cè)和圖像分析過(guò)程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

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