原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進行探測,從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA??梢愿鞣N種屬的標(biāo)本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測組織芯片。
DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。
探針特異性至關(guān)重要。如果已知細(xì)胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據(jù)此設(shè)計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用:
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué):在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如,通過標(biāo)記特定基因的探針,動物組織原位雜交,可以檢測環(huán)境中微生物種群的分布和變化,進而研究其對環(huán)境的影響和作用。
進化生物學(xué):在進化生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關(guān)系。例如,通過比較不同物種之間基因序列的差異,可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進化歷程。
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