DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。
探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據(jù)此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,染色體熒光原位雜交,那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著,熒光原位雜交,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。
原位雜交技術的定義和基本原理原位雜交技術是一種基于核酸分子雜交原理,將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結合,從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術。原位雜交技術的基本原理是利用DNA或RNA的互補性,通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物,進而實現(xiàn)目標核酸序列的定位。
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