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原位雜交(In situ hybridazation)

固定

收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),熒光原位雜交,到達所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗,原位雜交,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成)

這一原理對于檢測一個特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個細胞里具體表達位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細胞內(nèi)RNA進行雜交以觀察該組織細胞中特定基因表達水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對于那些細胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,原位雜交檢測,并可完整地保持組織與細胞的形態(tài),染色體熒光原位雜交,更能準(zhǔn)確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括:

異源染色質(zhì)及多種染色體畸變檢測:通過遠緣雜交把有用遺傳物質(zhì)基因的異源染色質(zhì)漸滲到植物中。如帶有幾種抗病基因的黑麥1R染色體已被整合到許多高產(chǎn)的小麥品種中。原位雜交技術(shù)則是鑒定外源染色體(質(zhì))的有效手段。

基因組印記研究:基因組印記是指一個基因的兩條染色體上的DNA序列存在差異。通過植物原位雜交技術(shù),可以檢測到基因組印記的存在和分布,從而幫助確定基因組的進化、遺傳和功能特征。

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