染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標(biāo)記的已知堿基序列的核酸探針,依據(jù)堿基互補配對原理,植物染色體原位雜交檢測服務(wù),與中期染色體玻片標(biāo)本中的同源 DNA 序列進行雜交。
標(biāo)記可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),然后進行放1射自顯影;也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛,再用熒光顯微鏡進行觀察,即熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization,F(xiàn)ISH)技術(shù)。
原位雜交第三天
1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。
3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。
4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
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