植物組織原位雜交技術(shù)在植物基因表達和調(diào)控研究中具有廣泛的應用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長、逆境響應等方面的基因表達模式和調(diào)控機制。例如,可以利用該技術(shù)研究植物中的轉(zhuǎn)錄因子、信號轉(zhuǎn)導通路、代謝途徑等基因的表達和調(diào)控。此外,植物組織原位雜交技術(shù)還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。
總之植物組織原位雜交技術(shù)是一種重要的分子生物學技術(shù),可以用來研究植物基因的表達和調(diào)控。它具有操作簡便、結(jié)果可靠、應用廣泛等優(yōu)點,是植物分子生物學研究中不可或缺的工具。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,熒光原位雜交,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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