原位雜交技術在其他生物領域也有廣泛的應用,例如:
植物學研究:在植物學研究中,原位雜交技術可以用于檢測和定位特定基因的表達,研究基因組結構和進化。此外,還可以應用于植物染色體組型分析、基因組印記研究等方面。
微生物學研究:在微生物學領域,原位雜交技術可以用于研究細菌、病毒等微生物的基因表達和定位,以及它們在環(huán)境中的分布和相互作用。例如,通過標記特異性探針,動物組織原位雜交,可以檢測腸道微生物群落中的特定,研究其在人體健康和疾病發(fā)生中的作用。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘
3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次
4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
蛋白酶處理與后固定(本實驗不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。
2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。
4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
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