原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,湖北原位雜交,60℃,放置30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
熒光原位雜交(FISH)技術具有以下優(yōu)點:
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過程的特異性,染色體熒光原位雜交,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏,染色體原位雜交,可以檢測出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測單個基因序列。
快速簡便:FISH技術操作簡便,雜交過程可以在數(shù)小時或數(shù)天內完成,而且不需要過于復雜的設備,便于在實驗室開展。
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