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主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原理簡介
GFP、RFP等熒光蛋白因其的熒光性質(zhì)和靈敏性，常作為報告基因研究并分析基因產(chǎn)物在細(xì)胞中的定位和相互作用等。將目標(biāo)蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合，通過瞬時轉(zhuǎn)化技術(shù)或穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，使得該融合蛋白在受體材料細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，目標(biāo)蛋白會牽引熒光蛋白一起定位到目標(biāo)細(xì)胞器，通過顯微鏡觀察熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)顯示的位置，確定目標(biāo)蛋白的位置，從而確定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位情況。
啟動子篩選：尋找基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)控元件
基因表達(dá)的調(diào)控是一個復(fù)雜的過程，其中關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一就是轉(zhuǎn)錄的啟動子。轉(zhuǎn)錄是生物體內(nèi)基因表達(dá)的重要步驟，雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)，而轉(zhuǎn)錄的啟動子則是這一過程的關(guān)鍵調(diào)控元件。因此，啟動子的篩選對于理解基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制以及疾病的等方面都具有重要的意義。
啟動子的篩選通常是通過生物信息學(xué)的方法進(jìn)行的。首先，通過基因組測序和生物信息學(xué)分析，可以確定基因的啟動子區(qū)域，這一區(qū)域通常位于基因編碼區(qū)的上游。然后，通過各種預(yù)測算法，可以分析啟動子區(qū)域內(nèi)的DNA序列，以確定是否存在轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)。這些轉(zhuǎn)錄因子通常是蛋白質(zhì)，它們可以與DNA序列結(jié)合，從而影響轉(zhuǎn)錄的效率和程度。
蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位的研究方法
1、融合報告基因定位法
將綠色熒光蛋白（GFP）及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）等報告基因，與目標(biāo)蛋白基因融合在一起，由目標(biāo)蛋白的引導(dǎo)信號進(jìn)行亞細(xì)胞定位，對報告蛋白的光信號進(jìn)行跟蹤和觀察，從而確定目標(biāo)蛋白的定位。該方法是目前使用廣泛的蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位研究方法。
2、熒光標(biāo)記定位法
將反應(yīng)與化學(xué)光學(xué)信號相結(jié)合，通過特異性的熒光標(biāo)記與目標(biāo)蛋白（抗原）結(jié)合，通過熒光信號檢測，確定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞位置。目前標(biāo)記信號不局限于熒光素，還有同位素、酶、膠體金顆粒、納米金屬顆粒等。
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第3年
