染色體熒光原位雜交-原位雜交-貝科新肽科技公司(查看)
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更新時間:2024-12-25
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業(yè)務:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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(夏先生 先生)
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把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標記,染色體熒光原位雜交,以使濾膜與性自顯影片位置對應。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標記(間接或直接)而得名,熒光原位雜交,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領域?;驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,原位雜交檢測,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

和其它實驗方法一樣,必須同時設對照試驗以證明其實驗結果特異性。對照試驗的設置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點是它的高度特異性,它可測定組織、培養(yǎng)的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應用高敏感度的性標記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA,原位雜交,其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時很少發(fā)生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此,對ISHH結果的解釋應持慎重態(tài)度,特別是前人未報告過的新發(fā)現(xiàn)。

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