原位雜交(In situ hybridazation)
固定
收集斑馬魚的胚胎,動物組織原位雜交,在Holfretor水中培養(yǎng),到達所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后換成,植物組織原位雜交,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng),可阻斷色素的形成)
熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)是在性原位雜交技術基礎上發(fā)展起來的一種非性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,熒光原位雜交,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
FISH技術具有許多優(yōu)點,如非性、高特異性、高靈敏度、快速簡便、可多重染色等。這些特點使得FISH技術在細胞生物學和臨床醫(yī)學領域得到了廣泛應用,例如用于研究基因表達、基因組變異和染色體異常等。
原位雜交技術的原理是什么?有何用途
原位雜交技術的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,原位雜交,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物(曾呈奎等2000)。
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