原位雜交雜交液注意事項:
(1)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。
(2)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低,雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的雜交溫度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的(尤其對雙鏈核酸探針)。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等,都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合,水稻原位雜交測試服務(wù),以減低背景。
原位雜交的應(yīng)用范圍:
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
②感1染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳1頭狀瘤1病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測;
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測;
④基因在染色體上的定位;
⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫1瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
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