將少數(shù)菌落轉移到纖維素濾膜上
(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上,再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
(3) 倒置平板,于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應的結果。
(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。
tunel流式細胞凋亡檢測服務通常稱為細胞程序性死1亡,是由基因控制的主動性細胞死1亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細胞凋亡與多種疾病密切相關,如癌細胞具有連續(xù)增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫1瘤診斷,療1效評價和預后預測提供了重要的參考指標。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯(lián)1苯1胺(DAB)產(chǎn)生深棕色反應,特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在光學顯微鏡下即可觀察凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂,水稻RNA原位雜交檢測技術服務,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)在單細胞水平上的凋亡原位檢測。還可應用于抗腫1瘤藥的藥1效評價,以及通過雙色法確定細胞類型和分化階段。
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