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科銳諾(查看)-染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)

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隨著分子病理技術(shù)的蓬勃發(fā)展,越來越多的疾病相關(guān)分子改變被發(fā)現(xiàn)并逐步應(yīng)用于臨床實踐中。自21世紀(jì)以來,分子病理診斷逐漸受到我國病理學(xué)工作者的認(rèn)可和重視,并逐步在大醫(yī)院病理科開展起來,特別是在遺傳性疾病、感1染性疾病、腫1瘤等方面分子病理診斷已取得了長足的進(jìn)步。 目前,我國已穩(wěn)定開展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術(shù)。

原位雜交第二天

1.

1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。

2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,染色體原位雜交技術(shù)服務(wù),重復(fù)一次。

3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。

4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。

2.

1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。

2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天

1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。

2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。

3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。

4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色

5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。

6)4C冰箱保存。

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