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湖北熒光原位雜交-貝科新肽科技公司

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FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,熒光原位雜交,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

而是對完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測,從整體上把握探針的結(jié)合部位,然后對胚胎進(jìn)行切片,以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來檢測;也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者,以標(biāo)記探針,然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測。

在原位雜交過程中,需要使用標(biāo)記的核酸探針,通常是在性核素或非性物質(zhì)中標(biāo)記的。這些探針可以通過不同的方式制備,例如從已知序列的DNA或RNA制備,或者通過使用生物信息學(xué)方法設(shè)計(jì)和合成新的探針。

在進(jìn)行原位雜交時,細(xì)胞或組織需要固定在適當(dāng)?shù)闹С治锷?,例如載玻片。然后,探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交,通常是在加熱條件下進(jìn)行的。接下來,通過洗滌和顯影步驟去除未結(jié)合的探針和信號增強(qiáng)劑,后用顯微鏡觀察雜交信號的位置。

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